segunda-feira, 7 de junho de 2010
sexta-feira, 7 de maio de 2010
sexta-feira, 23 de abril de 2010
Metodologia
Metodologia
O laboratório onde se encontrava o cultivo de microalgas, não era exposto à luz solar, de forma a podermos controlar a intensidade luminosa através das luzes artificiais que utilizamos.
As algas estavam sujeitas a 12 horas de luz e a 12 horas de obscuridade, controladas por um temporizador.
O cultivo era constituído por 6 aquários, 3 de cada espécie, estando agrupados aos pares (1), (2) e (3), e cada par era constituído por um aquário de cada espécie, ou seja, denominamos os nossos aquários da seguinte forma: (1) Chlorella sp. 1 e N.ocullata 1; (2) Chlorella sp. 2 e N.ocullata 2; (3) Chlorella sp.3 e N.ocullata 3. Estes aquários continham borbulhadores, para que a concentração fosse mais ou menos homogénea em todo o aquário.
As microalgas para se conseguirem reproduzir necessitam de luz, água, CO2 e nutrientes. O meio de cultura é um dos factores-chave para que a produção de microalgas tenha sucesso. Este crescimento é exponencial.
Visto que as algas necessitam de um meio de cultivo óptimo, teve de ser recolhida água do mar que sofreu um tratamento para que se tornasse o meio ideal para o crescimento das algas.
Depois de recolhida a água do mar, esta foi distribuída pelos seis aquários, ficando cada um com 2,5 L. Filtrámos a água para que não permanecessem resíduos e impurezas.
Posteriormente esterilizamos todas as águas com hipoclorito de sódio e passadas 24 horas adicionamos tiossulfato de sódio.
Após algumas horas foram adicionados os nutrientes e as microalgas. Deste modo, cada aquário contém 2,5 litros de água, 2,5 ml de NaNO3, 2,5 ml de NaH2PO4, 2,5 ml de solução de metais e 1,25 ml de solução de vitaminas.
Efectuamos a contagem inicial, e nos dias seguintes, sempre à mesma hora do dia, era realizada a contagem das microalgas.
Para a contagem das microalgas, foi utilizada a câmara de contagem de Neubauer, que consiste numa lâmina utilizada na microscopia, mais espessa do que uma lâmina normal, com marcações em quadrantes, de medidas conhecidas.
As contagens eram efectuadas regularmente através do seguinte processo:
• Retirávamos uma amostra de cerca de 10 ml de cada aquário, com uma pipeta graduada, e colocávamos cada amostra num gobelé com o respectivo nome de cada aquário.
• De seguida, adicionávamos entre duas a quatro gotas de formalina a 4%, com uma pipeta de Pasteur, em cada um dos gobelés, de forma a “matar” ou imobilizar as células, caso contrário a contagem seria impossível.
• Passados alguns minutos, após a formalina ter actuado, retirámos uma amostra de microalgas, já imobilizadas, do gobelé com uma pipeta de Pasteur, preenchemos a câmara de Neubauer e cobrimos com a respectiva lamela.
• Após todos os pontos anteriores estarem realizados, processou-se a contagem ao microscópio.
O laboratório onde se encontrava o cultivo de microalgas, não era exposto à luz solar, de forma a podermos controlar a intensidade luminosa através das luzes artificiais que utilizamos.
As algas estavam sujeitas a 12 horas de luz e a 12 horas de obscuridade, controladas por um temporizador.
O cultivo era constituído por 6 aquários, 3 de cada espécie, estando agrupados aos pares (1), (2) e (3), e cada par era constituído por um aquário de cada espécie, ou seja, denominamos os nossos aquários da seguinte forma: (1) Chlorella sp. 1 e N.ocullata 1; (2) Chlorella sp. 2 e N.ocullata 2; (3) Chlorella sp.3 e N.ocullata 3. Estes aquários continham borbulhadores, para que a concentração fosse mais ou menos homogénea em todo o aquário.
As microalgas para se conseguirem reproduzir necessitam de luz, água, CO2 e nutrientes. O meio de cultura é um dos factores-chave para que a produção de microalgas tenha sucesso. Este crescimento é exponencial.
Visto que as algas necessitam de um meio de cultivo óptimo, teve de ser recolhida água do mar que sofreu um tratamento para que se tornasse o meio ideal para o crescimento das algas.
Depois de recolhida a água do mar, esta foi distribuída pelos seis aquários, ficando cada um com 2,5 L. Filtrámos a água para que não permanecessem resíduos e impurezas.
Posteriormente esterilizamos todas as águas com hipoclorito de sódio e passadas 24 horas adicionamos tiossulfato de sódio.
Após algumas horas foram adicionados os nutrientes e as microalgas. Deste modo, cada aquário contém 2,5 litros de água, 2,5 ml de NaNO3, 2,5 ml de NaH2PO4, 2,5 ml de solução de metais e 1,25 ml de solução de vitaminas.
Efectuamos a contagem inicial, e nos dias seguintes, sempre à mesma hora do dia, era realizada a contagem das microalgas.
Para a contagem das microalgas, foi utilizada a câmara de contagem de Neubauer, que consiste numa lâmina utilizada na microscopia, mais espessa do que uma lâmina normal, com marcações em quadrantes, de medidas conhecidas.
As contagens eram efectuadas regularmente através do seguinte processo:
• Retirávamos uma amostra de cerca de 10 ml de cada aquário, com uma pipeta graduada, e colocávamos cada amostra num gobelé com o respectivo nome de cada aquário.
• De seguida, adicionávamos entre duas a quatro gotas de formalina a 4%, com uma pipeta de Pasteur, em cada um dos gobelés, de forma a “matar” ou imobilizar as células, caso contrário a contagem seria impossível.
• Passados alguns minutos, após a formalina ter actuado, retirámos uma amostra de microalgas, já imobilizadas, do gobelé com uma pipeta de Pasteur, preenchemos a câmara de Neubauer e cobrimos com a respectiva lamela.
• Após todos os pontos anteriores estarem realizados, processou-se a contagem ao microscópio.
Procedimento experimental - Cultivo de Microalgas
Procedimento experimental
1. Recolha de água:
1.1. Recolher água directamente do mar.
1.2. Filtrar a água, para eliminar resíduos maiores (macroalgas, pequenos ramos, etc.)
1.3. Esterilizar a água utilizando hipoclorito de sódio (lixívia tradicional).
• 1 ml de lixívia para cada litro de água do mar.
• Esta água permanece com arejamento durante 24 horas.
1.4. Após as 24 horas, adicionar tiossulfato de sódio e deixar com arejamento durante, pelo menos, 2 horas.
2. Adição de inóculo:
2.1. Após as 2 horas do passo anterior, a água encontra-se pronta a receber o inoculo (microalgas).
2.2. Adicionar os nutrientes:
• 1 ml por cada litro de água de NaNO3;
• 1 ml por cada litro de água de NaH2PO4;
• 1 ml por cada litro de água da solução de metais;
• 0,5 ml por cada litro de água da solução de vitaminas.
3. Adicionar 100 ml da solução contendo as microalgas em cada aquário.
4. Determinar a concentração inicial:
• Retirar uma amostra, cerca de 10 ml e adicionar formalina a 4% (Cuidado no manuseamento da formalina).
5. Utilizar a câmara de contagem de Neubauer:
• Preencher a câmara com a amostra, utilizando uma pipeta de Pasteur.
• Aguardar entre 1 a 2 minutos e fazer contagem ao microscópio.
1. Recolha de água:
1.1. Recolher água directamente do mar.
1.2. Filtrar a água, para eliminar resíduos maiores (macroalgas, pequenos ramos, etc.)
1.3. Esterilizar a água utilizando hipoclorito de sódio (lixívia tradicional).
• 1 ml de lixívia para cada litro de água do mar.
• Esta água permanece com arejamento durante 24 horas.
1.4. Após as 24 horas, adicionar tiossulfato de sódio e deixar com arejamento durante, pelo menos, 2 horas.
2. Adição de inóculo:
2.1. Após as 2 horas do passo anterior, a água encontra-se pronta a receber o inoculo (microalgas).
2.2. Adicionar os nutrientes:
• 1 ml por cada litro de água de NaNO3;
• 1 ml por cada litro de água de NaH2PO4;
• 1 ml por cada litro de água da solução de metais;
• 0,5 ml por cada litro de água da solução de vitaminas.
3. Adicionar 100 ml da solução contendo as microalgas em cada aquário.
4. Determinar a concentração inicial:
• Retirar uma amostra, cerca de 10 ml e adicionar formalina a 4% (Cuidado no manuseamento da formalina).
5. Utilizar a câmara de contagem de Neubauer:
• Preencher a câmara com a amostra, utilizando uma pipeta de Pasteur.
• Aguardar entre 1 a 2 minutos e fazer contagem ao microscópio.
Visita de estudo à Estação de Biologia Marinha do Funchal
No dia 31 de Janeiro, fizemos uma visita de estudo à Estação de Biologia Marinha do Funchal, como o Rúben Figueira e alguns dos elementos que estão a orientar o seu trabalho de mestrado.
Aprendemos como é que se realizava o cultivo de microalgas e quais os materiais necessários ao cultivo.
Tivemos ainda a oportunidade de verificar como é que se faz a contagem das microalgas na câmara de Neubauer ao microacópio.
Aprendemos como é que se realizava o cultivo de microalgas e quais os materiais necessários ao cultivo.
Tivemos ainda a oportunidade de verificar como é que se faz a contagem das microalgas na câmara de Neubauer ao microacópio.
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